grna和sgrna区别?
sgrna是single guide RNA(单导向RNA)的缩写。在CRISPR/Cas9系统中sgRNA与gRNA是一个概念。
CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)是原核生物基因组内的一段重复序列,是生命进化历史上,细菌和病毒进行斗争产生的免疫武器,简单说就是病毒能把自己的基因整合到细菌,利用细菌的细胞工具为自己的基因复制服务。
细菌为了将病毒的外来入侵基因清除,进化出CRISPR-Cas9系统,利用这个系统,细菌可以不动声色地把病毒基因从自己的基因组上切除,这是细菌特有的免疫系统。
基因编辑实验流程?
基因编辑技术是一种精准的基因修饰方法,通常可以通过以下流程进行实验:
1. 选择目标细胞
选择需要进行基因编辑的细胞,包括细胞系、原代细胞或动物个体的生殖细胞等,一般需要选择易于培养、转染效率高且生长速度快的细胞。
2. 设计CRISPR-Cas9系统
根据需要编辑的基因序列,设计特异性的sgRNA(single guide RNA)和Cas9(CRISPR associated protein 9)蛋白,构建CRISPR-Cas9系统。sgRNA主要用于识别特定基因序列,引导Cas9到该序列并切割,从而实现基因编辑。
3. 转染CRISPR-Cas9系统
将构建好的CRISPR-Cas9系统转染到目标细胞中,通过各种方式(如电穿孔、化学物质介导等)将CRISPR-Cas9系统导入到细胞内,使其能够进入到目标细胞并进行基因编辑。
4. 序列分析编辑效果
等待足够时间后,取出目标细胞,提取DNA,进行PCR扩增,并通过测序等技术分析基因编辑效果。在此基础上,可以筛选其相应的目标细胞,用于后续的实验研究或植入到实验动物体内进行进一步研究。
总的来说,基因编辑实验流程需要进行以上几个步骤,这些步骤需要得到精确操作并且实验设计具有可重复性。
crispr系统中sgrna和grna一样吗?
个人认为是功能一样、实质是不一样。gRNA负责的是真核细胞内的 RNA加工 的常规步骤,它配对的是RNA,而且只能对mRNA增添或删除U。
而sgRNA是细菌、古菌里的系统,是负责识别特定自身基因组 DNA序列 的工具,它配对的是DNA,而且识别的是5`-GN19NGG-3`(CRISPR的靶点序列),然后Cas9再在靶点处把DNA切断。
转基因与crispr的区别?
CRISPR (Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats)是细菌用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统。科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶可在多种细胞(包括iPS)的特定的基因组位点上进行切割,修饰。 Rudolf Jaenisch 研究组将Cas9与Te1和Tet2特异的sgRNA共注射到小鼠的受精卵中,成功得到双基因敲除的纯合子小鼠,效率高达80%。 他们将Cas9/sgRNA 与带突变序列的引物共注射,能准确在小鼠两个基因引入所要的点突变。在ES细胞中他们更是成功的一次敲除了五个基因。与ZFN/TALEN相比,CRISPR/Cas更易于操作,效率更高,更容易得到纯合子突变体,而且可以在不同的位点同时引入多个突变。但该系统是否有脱靶效应尚需进一步的研究。
传统的转基因和基因打靶技术,由于技术稳定成熟,可以对小鼠和大鼠的基因组序列进行各种修饰,仍将是模式动物的构建的主要技术。 核酸酶ZFN/TALEN 尤其是CRISPR/Cas技术如果能解决脱靶效应的话,有可能会广泛应用于小鼠,大鼠及其他模式动物的制备和研究中,成为传统的转基因和基因打靶技术的重要补充。