怎样选择合适的引物？pcr技术引物结合位点是哪？

怎样选择合适的引物？

在Pubmed网站找到相应基因的mRNA序列，复制到引物设计软件（如Primer Premier），软件会设计出不同的正反链引物，选择合适的（评分较高的），复制到Pubmed网站，下拉有一个Pubmed-Blast，黏贴软件设计出的前后引物，通过搜索结果确定引物是否正确及其特异性。

pcr技术引物结合位点是哪？

设计好引物后，分别在上下游引物的5’端加上你所需要引入的酶切位点就可以了。如果PCR产物需要酶切，就需要加上保护碱基。不同酶切位点所需要的保护碱基是不一样的，一般参考NEB网站上的一个保护碱基表。一搜就有了。

如果不做PCR产物酶切而是直接连接T载体，就可以不加保护碱基，PCR结束后直接加A连T,然后按流程操作就可以了。

一般是需要转化-验证-测序，如果是构建表达载体的话还有酶切、连接、验证。